相衬显微镜的临床应用
相衬显微镜主要用于新鲜液体标本中细胞和微生物的检查,尤其适用于活细胞检查。一般是取新鲜液体标本,加上盖玻片(如用油镜时,还需在盖玻片上滴加镜油)立即进行检验。当前相衬显微镜主要用于以下几个方面：
1、血液学检验
用于血小板计数、血液中寄生虫检查和某些活细胞观察等。血小板体积小而透明,一般光学显微镜很难看清。新鲜血液直接用相衬显微镜检查,可以观察到疟原虫滋养体e红细胞内呈阿米巴样活泼运动。也可看到中性粒细胞和单核细胞的运动和吞噬细菌和异物(如碳颗粒)等现象。
2、尿分析
用于辨认新鲜尿中各种细胞和管型,特别是透明管型、白细胞、肾小管上皮细胞以及红细胞形态的分类等。
3、微生物学检验
用于不染色或染不上色的细菌、螺旋体、真菌孢子等的快速辨认,特别是对具有鞭毛、荚膜等特殊形态微生物的鉴别。
4、对活细胞的连续观察
在细胞培养过程中,不允许对培养细胞进行染色。为了对活细胞连续观察,必须在专用的倒置显微镜中加相差装置。
相衬显微镜使用注意事项
1、相位倒转 当n’<n或n’>n时得到象的明暗反差正好相反，称为相位倒转。当相位差δ=0时是无法识别的，随着δ的增大反差变大，当δ继续增大到某一值后会出现相位倒转。用90%高吸光值（高反差）物镜时，这个转变值约为0.55λ，用70%标准吸光值的物镜时约为0.33λ。较高吸光值的物镜应该用于分辨较小的光程差。
2、晕轮和渐暗效应
在相衬显微镜成象过程中，某一结构由于相位的延迟而变暗时，并不是光的损失，而是光在象平面上重新分配的结果。因此在黑暗区域明显消失的光会在较暗物体的周围出现一个明亮的晕轮。这是相衬显微镜的缺点，它妨碍了精细结构的观察，当环状光阑很窄时晕轮现象更为严重。相衬显微镜的另一个现象是渐暗效应，指相差观察相位延迟相同的较大区域时，该区域边缘会出现反差下降。
3、样品厚度的影响
当进行相差观察时，样品的厚度应该为5μm或者更薄，当采用较厚的样品时，样品的上层是很楚的，深层则会模糊不清并且会产生相位移干扰及光的散射干扰。
4、盖玻片和载玻片的影响
样品一定要盖上盖上盖玻片，否则环状光阑的亮环和相板的暗环很难重合。相差观察对载玻片和盖玻片的玻璃质量也有较高e要求，当有划痕，厚薄不均或凹凸不平时会产生亮环歪斜及相位干扰。另外玻片过厚或过薄时会使环状光阑亮环变大或变小。
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