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显微镜专栏

显微观察术——霍夫曼相衬原理

时间:2019/7/4 14:00:42   作者:郑士利   来源:正势利   阅读:275   评论:0
内容摘要:1)霍夫曼:光线穿过设于聚光镜内的狭缝光阑后并经“相位物体”(透明体)折射,再经过专用物镜内的具有暗、灰、明三个区的一块滤光片,而最终使光线按折射角的不同呈明暗的变化,其所成的像也类似DIC那样具体浮雕效果。2)原理:斜射光照射到标本产生折射、衍射,光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影,从而使透明标本表面产生明暗差...

1)霍夫曼:光线穿过设于聚光镜内的狭缝光阑后并经相位物体”(透明体)折射,再经过专用物镜内的具有暗、灰、明三个区的一块滤光片,而最终使光线按折射角的不同呈明暗的变化,其所成的像也类似DIC那样具体浮雕效果。

2)原理:

斜射光照射到标本产生折射、衍射,光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影,从而使透明标本表面产生明暗差异,增加观察对比度。

3)历史:

1975年,Robert Hoffman 博士发明

200年,专利到期,各显微镜厂家纷纷推出采用以自己名义命名的RC技术产品。

4)特点:

提高未染色标本的可见性和对比度;图象显示阴影或近似三维结构而不会产生光晕;可检测双折射物质(岩石切片、水晶、骨头);可检测玻璃,塑料等培养皿中的细胞、器官和组织;聚光镜的工作距离可以设计的更长;RC物镜也可用于明场、暗场和荧光观察。

5)缺点:

①观察效果与标本方向密切相关;

操作复杂;

必须有多元件,结构复杂的高数值孔径RC物镜;

观察荧光效果不如明场物镜

6)应用:

适用于相位物体、双折射物体、染色试样、柱状物体以及具有表面和次表面特征的物体进行高分辨率显微观察,可对细胞组织(无论活体,染色,未染色)、透明液态组织、晶体表面细节、透明聚合物、培养皿中的培养组织进行动态显微观察及科研分析。主要应用于高校、科学研究机构、检验检疫所、农林牧渔等部门。



相差调制的总体原理是差不多的,差别就在于怎样将相位差转换为光强的变化。 

霍夫曼调制一个关键是他有一个“光密度梯度调节器”,就是将一个镜片分成三个部分,从左到右,一面透光率1%,中间透光率10%,另外一面是100%的透过率, 

可能就是因为衍射光线有偏折到1%或者100%的部分这两种不同的可能, 

从而引起光强变化,而非衍射光则通过中间的10%透过率的部分。 


原理是利用斜射光照射,它将相位梯度转换为光强度变化,这样对厚样品观察才有立体感,可进行显微操作,普通相衬只是图像有明暗差,只能观察细胞的外部形态,没有立体效果


HMC照明的一个例子是使用在体外受精实验中,其中光照下几乎透明的卵母细胞是很难看清楚。所以HMC没有DIC的效果好。

HMC的系统通常包括一个带狭缝的聚光镜和带狭缝的物镜。聚光镜里还有一个可以旋转的起偏器。根据HMC的原理一些显微镜制造商引进该技术的变种,例如尼康的高级调制相衬(NAMC),奥林巴斯的浮雕相衬(RC)和徕卡的集成霍夫曼调制相衬(IMC)。


标签:微观 观察 原理 











 




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